顯微拉曼成像系統(tǒng)能夠?qū)N壁生長(zhǎng)的細(xì)胞進(jìn)行高分辨率、動(dòng)態(tài)的觀察和分析。貼壁細(xì)胞是指那些在人工基質(zhì)表面如培養(yǎng)皿底部附著并展開生長(zhǎng)的細(xì)胞，例如肌細(xì)胞、神經(jīng)元等。共聚焦顯微鏡利用激光作為光源，采用準(zhǔn)確的光學(xué)系統(tǒng)，可以實(shí)時(shí)觀察并記錄細(xì)胞內(nèi)的多種生理活動(dòng)及其變化。
以下從不同方面講解了顯微拉曼成像系統(tǒng)的關(guān)鍵知識(shí)點(diǎn)：
1.基本原理
-使用激光作為激發(fā)光源，通過光源針孔與檢測(cè)針孔的共軛聚焦技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本的斷層掃描，獲取高分辨率的光學(xué)切片。
-該技術(shù)允許用戶觀察細(xì)胞內(nèi)特定深度的平面，從而獲得清晰的細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)圖像，而不受其他平面信號(hào)的干擾。
2.技術(shù)特點(diǎn)
-可以對(duì)細(xì)胞內(nèi)熒光進(jìn)行定位和定量分析，例如觀察Ca2+在細(xì)胞興奮、分化、死亡等過程中的變化。
-光學(xué)切片的厚度取決于物鏡的數(shù)值孔徑(NA)、針孔的大小和Z-Drive，這些參數(shù)相互配合，決定了成像的精度和質(zhì)量。
3.系統(tǒng)組成
-典型的共聚焦顯微鏡系統(tǒng)包括激光光源、針孔、光學(xué)過濾系統(tǒng)、掃描裝置、探測(cè)器等核心部件。
-探測(cè)器通常使用光電倍增管(PMT)，用于接收樣品發(fā)射的熒光信號(hào)，并將其轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，以供后續(xù)處理和分析。
4.掃描方式
-采用XY掃描方式，即在水平方向上對(duì)樣品進(jìn)行逐點(diǎn)掃描，以建立整個(gè)觀測(cè)區(qū)域的圖像。
-結(jié)合Z軸方向的準(zhǔn)確控制，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞或組織體積內(nèi)任意位置的三維成像。
5.應(yīng)用范圍
-在生物學(xué)領(lǐng)域，被廣泛用于研究細(xì)胞間的相互作用、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞、蛋白質(zhì)定位等生物過程。
-活細(xì)胞培養(yǎng)與N-SIM超分辨成像相結(jié)合的共聚焦顯微鏡，為研究人員提供了更多觀察細(xì)胞生理狀態(tài)的可能性。
6.樣品制備
-樣品制備要求嚴(yán)格，操作技巧需熟練，以保證樣品在觀測(cè)過程中的活性和穩(wěn)定性。
-高質(zhì)量的樣品制備是獲取準(zhǔn)確可靠數(shù)據(jù)的前提，對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋至關(guān)重要。
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